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影響ELISA試劑盒測(cè)定成果有哪些原因及解決辦法

更新時(shí)間:2025-06-25    點(diǎn)擊次數(shù):201

  

  以下是本生對(duì)影響ELISA試劑盒測(cè)定成果的常見原因及對(duì)應(yīng)解決辦法的總結(jié):

  一、試劑相關(guān)因素?

  試劑質(zhì)量問題?

  原因?:使用過期試劑、不同批號(hào)混用或非正規(guī)廠家產(chǎn)品可能導(dǎo)致靈敏度下降或假陽(yáng)性/陰性。

  解決?:選擇有“三證"的品牌試劑,避免混用批號(hào),使用前室溫平衡20-30分鐘。

  試劑保存不當(dāng)?

  原因?:未按說(shuō)明書要求儲(chǔ)存(如2-8℃或-20℃),導(dǎo)致活性喪失。

  解決?:分裝保存高頻使用試劑,避免反復(fù)凍融;OPD等底物需現(xiàn)配現(xiàn)用。

  二、樣本相關(guān)因素?

  內(nèi)源性干擾?

  類風(fēng)濕因子(RF)?:與IgG非特異結(jié)合導(dǎo)致假陽(yáng)性??赏ㄟ^使用F(ab)?片段抗體處理樣本。

  補(bǔ)體干擾?:激活后交聯(lián)抗體或封閉表位。建議用EDTA抗凝血或56℃加熱滅活補(bǔ)體。

  外源性干擾?

  溶血/脂血?:血紅蛋白或脂類干擾顯色。需離心后取澄清上清液檢測(cè)。

  細(xì)菌污染?:內(nèi)源性酶(如HRP)導(dǎo)致假陽(yáng)性。嚴(yán)格無(wú)菌操作并避免樣本長(zhǎng)期存放。


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  三、操作相關(guān)因素?

  加樣誤差?

  原因?:加樣量不準(zhǔn)、氣泡產(chǎn)生或孔間交叉污染。

  解決?:使用校準(zhǔn)移液器,加樣至孔底1/3處,避免觸碰孔壁。

  溫育問題?

  原因?:時(shí)間/溫度不達(dá)標(biāo)或蒸發(fā)導(dǎo)致濃度偏差。

  解決?:貼封片防蒸發(fā),嚴(yán)格按說(shuō)明書設(shè)置溫育參數(shù),水浴減少邊緣效應(yīng)。

  洗滌不凈?

  原因?:洗液殘留或洗板針堵塞。

  解決?:手工洗板時(shí)注滿每孔,自動(dòng)洗板機(jī)定期維護(hù)。

  四、設(shè)備與環(huán)境因素?

  儀器校準(zhǔn)?

  原因?:酶標(biāo)儀光源不穩(wěn)定或移液器誤差。

  解決?:定期校準(zhǔn)設(shè)備,預(yù)熱酶標(biāo)儀15分鐘以上。

  溫濕度控制?

  原因?:高溫或光照加速底物降解。

  解決?:顯色階段避光,實(shí)驗(yàn)室保持恒溫(20-25℃)。

  五、其他注意事項(xiàng)?

  方法學(xué)選擇?:競(jìng)爭(zhēng)抑制法重復(fù)性較差,優(yōu)先選用雙抗體夾心法等穩(wěn)定性高的方法。

  質(zhì)控品使用?:每批次實(shí)驗(yàn)加入陰/陽(yáng)性對(duì)照,監(jiān)控系統(tǒng)誤差。

  通過綜合控制上述因素,可顯著提高ELISA檢測(cè)的準(zhǔn)確性和可靠性。

  注:以上資料僅供參考,具體請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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